плазма кроличья цитратная сухая, 6х3 мл (113306), Мерк

Bactident® коагулаза
Для обнаружения энзима коагулаза, выделяемого staphylococcus aureus

Способ действия
Коагулаза – это энзим, способный коагулировать плазму. Staphylococcus aureus формирует два вида коагулазы. Свободная коагулаза – это внеклеточный энзим, а связанная коагулаза располагается на поверхности стенки клетки. Оба энзима обнаруживаются в тестовой пробирке. При тесте на предметном стекле может обнаруживаться только связанная коагулаза.

Метод
Оставленная на ночь бульонная культура staph. aureus инкубируется с повторно гидратированной ЭДТУ кроличьей плазмой. Тест на коагулазу положителен, если более трех четвертей содержимого пробирки образуют слипшийся комок.

Стабильность
См. срок годности.
Bactident® коагулаза стабилен в течение 5 суток в растворенном (повторно гидратированном) состоянии при +2°C - +8°C. При -20°C он стабилен до 30 суток.

Хранение
Хранить в сухом, прохладном месте, в плотно закрытом контейнере при +2°C - +8°C. Хранить растворенную плазму при +2°C - +8°C или глубокого замороженной при -20°C. После размораживания повторно замораживать нельзя.

Безопасная утилизация
Содержимое пробирки включает бактерии, и оно должно утилизироваться безопасным способом. Этого можно достичь обработкой в автоклаве или помещением в 5 - 6% раствор дезинфицирующего средства не меньше, чем на 6 часов.

Экспериментальная процедура
• Проводить тест на коагулазу на 5 типичных и/или 5 атипичных колониях на агаре БЭРДА-ПАРКЕРА (№ в каталоге Merck 1.05406.) или 5 подозрительных колониях на другой культуральной среде (агар ЧЕПМЕНА № в каталоге Merck 1.05469., агар ФОГЕЛЯ-ДЖОНСОНА № в каталоге Merck 1.05405., кровяной агар (основа), № в каталоге Merck 1.10886.).
• Перенести каждую выбранную колонию стерильной бактериологической петлей в отдельные культуральные пробирки, содержащие бульон с сердечно-мозговым экстрактом (№ в каталоге Merck 1.10493.), и инкубировать при 37°C на протяжении 20 – 24 часов.
• Растворить сублимированную кроличью плазму с ЭДТУ в 3 мл дистиллированной или деминерализованной воды.
• Пипетировать стерильной пипеткой 0,3 мл повторно гидратированной Bactident® коагулазы в стерильную культуральную пробирку.
• Осторожно смешать 0,1 мл культуры в бульоне с сердечно-мозговым экстрактом и 1/2 бактериологической петли материала колоний из кровяного агара ЧЕПМЕНА или агара БЭРДА-ПАРКЕРА с 0,3 мл плазмы и инкубировать в водяной бане при 37°C. (Материал колоний прямо из культуры ФОГЕЛЯ-ДЖОНСОНА на маннитол-солевом агаре с хлоридом натрия и феноловым красным не подходит для теста. Сначала необходима культура из бульона с сердечно-мозговым экстрактом).
• Раз в час проверять содержимое пробирки на предмет коагуляции осторожным наклоном (без встряхивания).
• Тест на коагулазу положительный, если более трех четвертей содержимого пробирки образовали слипшийся комок.

Если тест отрицателен после 4 - 6 часов, следует продолжать инкубировать пробирку и сделать окончательную оценку через 24 часа. В качестве отрицательного контроля нужно приготовить бульон с сердечно-мозговым экстрактом, но без инокуляции. Признаков комкования быть не должно.

В качестве положительного контроля следует провести тест с коагулаза-положительным штаммом стафилококков.

отрицательный коагуляции нет
1 + положительный несколько маленьких отдельных комков
2 + положительный несколько маленьких слипшихся комков
3 + положительный большие, интенсивно коагулированные комки
4 + положительный полная коагуляция, содержимое не перемещается, при переворачивании пробирки

Примечания
Тест на предметном стекле, при котором колония смешивается с кроличьей плазмой на стекле (фактор слипания), обнаруживает только связанную коагулазу и может служить в лучшем случае скрининг-тестом. Возможны ложные положительные реакции и неспецифическая агглютинация.