тиогликолевая среда (для контроля стерильности) жидкая (Eur. Pharm.) Conda 500 г 1508-00

Среда для культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов при анализе на стерильность

Формула в граммах на литр

Панкреатический гидролизат казеина 15,0 Глюкоза (моногидрат) 5,0

Дрожжевой экстракт 5,0 Хлорид натрия 2,5

L-цистин 0,5 Тиогликолят натрия 0,5

Резазурин 0,001 Бактериологический агар 0,75

Конечная величина pH 7,1 ± 0,2 при 25°C

Приготовление

Развести 29 г среды в 1 литре дистиллированной воды. Тщательно перемешать и нагреть. Часто помешивая, довести до кипения. Кипятить в течение минуты до полного растворения. Разлить в пробирки 15?2 см (по 15 мл в каждую пробирку) и стерилизовать 15 минут при 121°C. Готовая среда имеет светло-янтарную окраску с розовым верхним слоем и должна храниться при 2–8°C. Охладить перед использованием и хранить в темном месте.

Готовую среду можно использовать через некоторое время после приготовления до тех пор, пока она не окислится на 30%, на что указывает розовый цвет на поверхности резазу­рина. Если степень окисления выше, среду можно нагреть повторно только один раз на пару или в кипящей воде, охладить и использовать.

Использование

Среда тиогликолевая жидкая используется для обнаружения микроорганизмов в тестах на стерильность (в соответствии со стандартом Фармакопеи США и стандартами Британской и Европейской Фармакопей).

Тиогликолят натрия нейтрализует бактериостатический эффект соединений, используемых в качестве консервантов в фармацевтических препаратах, в особенности, предназначенных для инъекций. Казеиновый пептон и дрожжевой экстракт – источники азота, витаминов, минеральных солей и аминокислот. Тиогликолят натрия и L-цистин снижают окислительно-восстановительный потенциал за счет удаления кислорода для поддержания низкого значения Eh. Декстроза – углеводный источник энергии, способствует быстрому и бурному росту микроорганизмов. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Резазурин – индикатор окисления, приобретающий розовый цвет. Бактериологический агар замедляет дисперсию CO₂ и диффузию O₂.

При использовании данной среды необязательно применять наслоение стерильного парафинового масла или проводить инкубацию в специальных контейнерах для анаэробов. Анаэробные организмы развиваются на дне пробирки, микроаэрофилы – в средней части среды, аэробы – в верхнем окисляемом слое.

Инокулировать и инкубировать при температуре 35±2°C не более 3-х дней.

Европейская Фармакопея при оценке стерильности продуктов, содержащих ртутные консерванты, реко­мендует проводить инкубацию в жидкой тиогликолевой среде при температуре 20–25°C. Для проведения теста на стимулирование роста аэробов, анаэробов и грибов инокулировать порции данной среды небольшим коли­чеством (не более 100 КОЕ) Clostridium sporogenes ATCC 11437, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 и Staphy­lococccus aureus ATCC 6538. Для определения стерильности инкубировать порции среды в течение 14 дней.

В случае содержания в исследуемом материале других консервантов растворить инокулят в достаточном количестве тиогликолята для подавления бактериостатического эффекта.

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании среды на тестовых культурах после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 24 часа.

Микроорганизмы / Рост
• Bacillus subtilis ATCC 6633 / Хороший
• Candida albicans ATCC 10231 / Хороший
• Neisseria meningitidis ATCC 13092 / Хороший
• Staphylococcus aureus ATCC 6538* / Хороший
• Clostridium sporogenes ATCC 11437* / Хороший
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027* /Хороший
• Bacteroides fragilis ATCC 25285 / Хороший
• Staphylococcus aureus ATCC25923 / Хороший
• Streptococcus pyogenes ATCC 19615 / Хороший
• Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 / Хороший

*В соответствии с Европейской Фармакопеей количество посевного материала должно быть не более 100 КОЕ. Инкубировать при 30–35°C не более 3 дней.